Caractérisation de l'extension C-terminale de l'ARN hélicase Dbp4 chez la levure Saccharomyces cerevisiae

Radji, Chiraz Akorédé Ibinikè (2019). « Caractérisation de l'extension C-terminale de l'ARN hélicase Dbp4 chez la levure Saccharomyces cerevisiae » Mémoire. Montréal (Québec, Canada), Université du Québec à Montréal, Maîtrise en biochimie.

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Résumé

Le projet porte sur l'étude de l'ARN hélicase Dbp4 (« DEAD-box protein 4 »). DBP4 est un gène essentiel chez Saccharomyces cerevisiae. Dbp4 est une protéine nucléolaire impliquée dans la synthèse de l'ARNr 18S lors de la formation de la sous-unité 40S du ribosome. Dbp4 est caractérisée par un cœur catalytique flanqué des extensions amino- et carboxy- terminales (N-terminale et C-terminale). L'objectif principal de ce projet est la caractérisation des acides aminés fonctionnels de l'extension C-terminale de la protéine Dbp4. L'étude permet d'identifier la présence de domaines conservés : le domaine de fonction inconnue DUF4217, un motif « coiled-coil » et des signaux de localisation nucléaire (NLS). Les résultats des analyses bio-informatiques suggèrent une déstabilisation du « coiled-coil » après introduction des mutations CC1 (K665P, K667P), CC2 (R680P, R681P) et 2CC (CC1 + CC2). Les expériences in vivo révèlent qu'une délétion du DUF4217 ou du « coiled-coil » est létale. Les mutations CC1 et 2CC génèrent un phénotype non-viable tandis que CC2 génère un phénotype viable. Les mutations introduites dans les NLS : mNLS3 (K672A, R673A) ; mNLS4 (K726A, K727A, K728A) ; m2NLS (3 et 4) et ΔNLS4, n'ont pas d'effet sur la croissance cellulaire. Les résultats démontrent que le domaine DUF4217 et le « coiled-coil » sont des éléments clefs dans la fonction de Dbp4 sur la survie cellulaire. Les tests de complémentation révèlent que plusieurs acides aminés présents dans l'extension C-terminale sont nécessaires à la survie cellulaire. Cette étude permet également de vérifier l'effet des mutations sur l'activité de Dbp4. Les analyses révèlent que le ratio 18S:25S diffère (1:2) dans les souches cc1 et Δcc comparativement au wt (1:1). On observe un défaut de production du 18S dans les souches mutantes cc1 et Δcc à 30 °C et 37 °C. Les résultats obtenus montrent que les mutations CC1 et ΔCC peuvent avoir un effet sur la production de l'ARNr 18S mature, ce qui suggère que le motif d'interaction protéique « coiled-coil » pourrait être impliqué dans la fonction de Dbp4 dans les réactions de clivage aboutissant à la synthèse de l'ARNr 18S. _____________________________________________________________________________ MOTS-CLÉS DE L’AUTEUR : ARNr 18S, ARN hélicase, DEAD-box, Dbp4.

Type: Mémoire accepté
Informations complémentaires: Le mémoire a été numérisé tel que transmis par l'auteur.
Directeur de thèse: Dragon, François
Mots-clés ou Sujets: ARN ribosomique 18S / ARN hélicases à boîte DEAD / Protéines de Saccharomyces cerevisiæ
Unité d'appartenance: Faculté des sciences > Département de chimie
Faculté des sciences > Département des sciences biologiques
Déposé par: Service des bibliothèques
Date de dépôt: 13 juill. 2020 15:28
Dernière modification: 13 juill. 2020 15:28
Adresse URL : http://archipel.uqam.ca/id/eprint/13411

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